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匯百試劑IPTG 【367-93-1】 科研用途介紹

大家都知道IPTG【CAS:367-93-1】在生物實驗室的用途非常廣泛,那么這個在生化研究領域,這個人人知曉的IPTG到底有哪些用途呢?下面小編為大家介紹下吧!
1.IPTG主要用作誘導劑,誘導蛋白表達,誘導乳糖操縱子表達。
2.IPTG通常和X-GAL【CAS:7240-90-6】一起搭配使用,用于藍白菌落的篩選。
3.IPTG也用在發酵提取,細胞培養中。
4.IPTG還可以用在疫苗研發、大腸桿菌表達目標蛋白、細胞重組表達等研究中。
IPTG誘導原理
首先
E. coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個結構基因,分別編碼半乳糖苷酶、滲透酶和乙?;D移酶,此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調節 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白,后者與O序列結合,使操縱子(元)受阻遏而處于關閉狀態。在啟動序列P上游還有一個分解(代謝)物基因激 活蛋白(CAP)結合位點。由P序列、O序列和CAP結合位點共同構成lac操縱子的調控區,三個酶的編碼基因即由同一調控區調節,實現基因產物的協調表達 。
其次
在沒有乳糖存在時,lac操縱子(元)處于阻遏狀態。此時,I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結合,阻礙RNA聚合酶與P序列結合,抑制轉錄啟動。當有乳糖存在時,lac操縱子(元)即可被誘導。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞,經β-半乳糖苷酶催化,轉變為異乳糖。后者作為一種誘導劑分子結合阻遏蛋白,使蛋白構象變化,導致阻遏蛋白與O序列解離、發生轉錄。異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的作用與異乳糖相同,是一 種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。
 
使用方法
首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并進行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然后轉化至lacZ缺失細胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
 
作用
誘導外源基因的表達,普遍應用于原核表達系統,使其表達量增高,產物穩定,具有易鑒定,易純化的優點。
 
匯百試劑作為國內大型糖苷系列產品生產商,向廣大科研單位供應純度99%~101%的高純度IPTG。經多次會議商討改良,匯百試劑目前完成IPTG【367-93-1】進一步技術純化。目前匯百試劑IPTG擁有工業級,試劑級,醫用級三個級別。
 
另外,我司常用生物試劑還有:碘代乙酰胺,X-GAL,PMSF, MOPS,鹽酸胍,蛋白酶k,G-418硫酸鹽等,產品種類幾千種,并代理國內多家知名試劑品牌,歡迎新老顧客前來訂購。
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